使用 LCMS™-8060NX 對人類血清的睪固酮 (Testosterone) 進行高靈敏度分析
LCM-8060NX
本報告舉例說明使用三重四極桿質譜儀 LCMS-8060NX，對血清中的睪固酮 (Testosterone) 進行高靈敏度分析。 使用標準樣品製作的校正曲線，在 0.05 - 1,000 pg/mL (R 2=0.9996) 濃度範圍內呈線性，定量下限濃度的 %RSD 為 2.47%，每一校正點的準確度範圍為 94.64 - 111.04%。此外，加入睪固酮 (1 pg/mL) 的血清樣品準確度為 105%，表示分析中使用的方法可適用於實際樣品。
睪固酮 (圖 1) 為睪丸和腎上腺產生的雄性素，是一種類固醇激素，有助於骨骼和肌肉的生長增強及造血功能。血中游離睪固酮濃度是多種疾病 (例如庫欣氏症候群和腫瘤) 的生物標記，在臨床上具有關鍵作用。血中睪固酮濃度通常以免疫分析法量測，但可能由於相似結構的類固醇賀爾蒙出現交叉反應，而影響量測結果。高選擇性的 LC/MS/MS 可避免傳統方法帶來的問題，達到更準確的定量分析結果，可望進入臨床應用。
樣品製備
圖 1. 睪固酮的結構式
標準樣品使用 50% 甲醇序列稀釋，以 0.05 - 1,000 pg/mL 的濃度製備，並繪製校正曲線。
對於加入血清的樣品，以市售不含類固醇的人類血清加入睪固酮，使血清濃度為 1 pg/mL。標準樣品及內標準品加入 100 μL 血清，然後以己烷 (hexane) 和乙酸乙酯 (ethyl acetate) (9:1) 混合液充分搖勻。所得溶液離心 10 分鐘，揮發有機溶劑層至完全乾燥，再使用 50% 甲醇溶解。
分析條件
HPLC 及 MS 的分析條件如表 1 所示。MRM 轉換如表 2 所示。
校正曲線
使用標準樣品 (內標準法，每一濃度 n=3) 製作的校正曲線，在 0.05 - 1,000 pg/mL 的動態範圍內具有良好的線性，決定係數 (R 2) 為 0.9996。定量下限濃度 (0.05 pg/mL) 的 %RSD 為 2.47%，每一校正點的準確度範圍為 94.64-111.04%。圖 2 為校正曲線，圖 3 為 0.05 pg/mL 標準溶液的 MRM 層析圖。